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beat365体育官网就流式细胞术常见样本的制备与保存详细分解
更新时间:2023-06-08   点击次数:481次

流式细胞术是当代细胞分析技术之一,包括细胞计数、细胞内/外抗原分子检测、细胞中DNA和RNA的倍体分析、细胞的生物学特性及功能分析等。

对于流式细胞分析而言,样本制备的好坏对终的检测结果有很大的影响。在免疫学和血液学中,应用流式细胞术分析的样本多为外周血、骨髓、各类体液(如脑脊液、胸水、腹水)以及人体的组织(如淋巴结、脾、肝等),这几种样本要如何制备和保存呢? 



外周血骨髓保存方法

收集样本后置于加有抗凝剂(一般选择肝素或EDTA)的试管中,室温保存,尽量在12 h内处理样本;若无法及时处理,4℃保存,此时好选择肝素抗凝管。


外周血骨髓处理步骤

一般不需要特殊处理制备单细胞悬液,所用试剂为淋巴细胞分离液和红细胞裂解液。但在临床检测中,为了避免细胞成分丢失,通常不推荐使用淋巴细胞分离液分离单核细胞。


外周血骨髓怎样选择抗凝剂

血液标本可以使用EDTA、ACD(枸橼酸葡萄糖)或肝素抗凝。一般认为,ACD和肝素抗凝的样本72 h内细胞是稳定的;EDTA抗凝48 h内是稳定的。EDTA适用于白细胞的免疫表型分析,可防止成熟的髓系细胞贴壁造成细胞损失,并具有较强的抗血小板凝集能力,但对细胞活性的保持不如肝素抗凝。同时EDTA是二价阳离子的强螯合剂,会影响Ca2+相关的抗原位点(如CD11b等),并会抑制与Ca2+ 相关的细胞功能。肝素常用于白细胞功能研究,可维持Ca2+Mg2+在细胞内的生理浓度,更好保持细胞活性,适用于放置时间较长、不能及时检测的样本,但不适合血小板的相关检测,骨髓样本优先选择肝素抗凝。


体液保存方法

收集样本后置于肝素抗凝管中,室温保存,且尽量在12 h内处理样本。若无法及时处理,则4℃保存,时间好不超过48 h。


体液处理方法

样本1000-1500 rpm离心5 min,弃去上清;加入含有0.1%牛血清白蛋白的磷酸盐缓冲液(PBS),离心洗涤5 min;

加入适量PBS重悬。如有细小沉淀,用300目尼龙网过滤后备用。


组织保存方法

切取新鲜组织样本置于生理盐水或PBS中,室温保存,尽量在12 h内处理样本;若无法及时处理,4℃保存,保存时间好不要超过48 h。不建议用甲醛、乙醇固定细胞,不要用酶、表面活性剂处理细胞。


组织处理方法

流式细胞术常用的组织样本制备单细胞悬液方法有:机械法、酶处理法、化学试剂处理法及表面活性剂处理法,在流式分析中,为保持抗原活性,多采用机械法处理样本。采用机械法需注意动作轻柔,尽量减少细胞的损伤。

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