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beat365体育官网推出ELISA试剂常见类型!
更新时间:2023-05-16   点击次数:539次

竞争法ELISA试剂(也称抑制或封闭法ELISA通过定量某种样品分析物对预计信号的干扰,来测定该分析物在样品中的含量,可通过以下方式进行:微孔板用一种分析物或一种对靶标分析物具有特异性的抗体包被(即直接法和间接法),再添加一种有部分某种检测的靶标分析物,以竞争结合抗体上的位点。信号与分析物含量呈负相关,因此,如果靶标分析物的浓度较分析物高,靶标分析物竞争性结合标记抗体,参考信号将会较靶标分析物的浓度较低的情况增强。

竞争法的理论基础是抗体,只有在抗体基础上,两种抗原才会形成竞争关系。该方法一般用来检测具有较少表位的小分子物质。

实验概要

以直接竞争法ELISA试剂为例,将特异性抗体吸附于固相载体,加入待测抗原(标准品或样本)标记的检测抗原,二者竞争与固相抗体结合,然后加入辣根过氧化物酶标记的亲和素,经过温育和洗涤后加入显色底物。显色的深浅与样品中待测物质含量呈负相关。

准备所有的试剂和梯度稀释的标准品。板条加入洗液静置浸泡30 秒。

标准品孔加入2倍倍比稀释的标准品;非特异性结合(NSB)和大结合(B0)孔加入标准品稀释液或培养基。

血清/血浆:样本孔加入样本;细胞培养上清:样本孔加入细胞培养上清。


除了Blank和非特异性结合(TA)孔空白,NSB孔加入1×检测缓冲液,其余每孔加入稀释的偶联物。

封膜,室温孵育1小时,洗涤6次。

除了TA和Blank孔,其余每孔加入稀释的HRP标记的链霉亲和素。

封膜,室温孵育30分钟,洗涤6次。

TA孔加入稀释的HRP标记的链霉亲和素。

每孔加入显色底物,避光,室温孵育5 - 30分钟。

每孔加入终止液,30分钟内,在450nm波长检测OD值,参考波长570nm或630nm。

注:以上步骤是以beat365体育官网ELISA试剂盒为参考,不同厂家的试剂盒操作步骤可能不一样,开始实验前一定要仔细阅读产品说明书哦~

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