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我司原代细胞培养与操作方法
更新时间:2022-03-07   点击次数:1108次

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原代细胞的培养:

原代细胞的培养是指直接从机体取下细胞、组织和器官后立即进行培养。因此,较为严格地说是指成功传代之前的培养,此时的细胞保持原有细胞的基本性质,如果是正常细胞,仍然保留二倍体数。但实际上,通常把第十代以内的培养细胞统称为原代细胞培养。

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原代细胞的培养有组织块培养和分散细胞培养。

组织块培养是将剪碎的组织块直接移植在培养瓶壁上,加入培养基后进行培养。

分散细胞培养大致步骤为:

将动物组织从机体中取出离散成单个细胞(常用),置合适的培养基中培养,使细胞得以生存、生长和繁殖(注意整个过程无菌)。

原代细胞操作方法:

(1)取成年新西兰大白兔,耳缘静脉注射空气处死后,取下兔子的双腿,立即用75%乙醇浸泡。

(2)移入细胞房内,去除双腿表面的皮毛及肌肉,剪取关节段,移至超菌工作台内。

(3)PBS洗涤数次,用手术刀或弯剪将关节表面的软骨组织取下。

(4)软骨组织块静置5min,弃去上层液体及悬浮组织,将软骨组织剪成1mm3的大小。移到离心管中加3倍体积的0.25%,置入37℃的恒温摇床中,振荡消化15-20min;

(5) 4℃静置5min;弃上清,PBS洗涤,去上清。加入0.2%胶原酶II,置入37℃的恒温摇床中,振荡消化2H;

(6)加入生长培养基终止消化,反复吹打后依次通过200目滤网。收集滤液,1200rpm离心8min,弃上清,用DMEM*培养基重新悬浮细胞, 放入37℃,5%CO2细胞培养箱中培养;

(7)细胞传代后放入预置有薄骨片或盖玻片的培养板中进行培养。细胞*展开后即可固定做原代鉴定。

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